《这一夜，WOMEN说相声》延续[表演工作坊]过去四夜“大师莅临晚会”的格式，在一场名为[TotalWomen]的产品公司酬宾大会上，两名超级业务员“蓝钻”和“红宝”，着急地等待一名神秘老太太亮相。结果，老太太没来，却来了一个自称是老太太孙女的女子（方芳饰），但这孙女却又不知道老太太到底该来干什么……于是，一系列和女人相关话题由此展开。

整部剧的演出分六段，包括单口、对口和群口相声，每一段各有主题，内容有女人话题、生活、女人内心世界等。赖声川的相声剧里总有一两段“非一般”的相声，颠覆相声逗笑风格的内容，这次也一样，其中一段〈骂街〉，方芳模仿老太太，学一段精彩绝伦的[骂街作秀]，不但融入黄梅戏、国剧、扬州小调、西北的小调，甚至连急智歌都派上用场…方芳还有一段散文式的单口，讲述女人失婚的心路历程。剧中还有一段坦荡又含蓄的《我姨妈》。蓝钻和红宝两位超级业务员，煞有介事地介绍一位“每个月都来一次的姨妈”，并讨论‘姨妈’来时的种种事迹，每次演出时都引发观众爆笑。